Zwyrodnienie dysku lędźwiowego jest związane z wariantem węglowodanowej sulfotransferazy 3 czesc 4

Nie wykryliśmy znaczącej różnicy w ekspresji COL2A1, innego genu wyrażanego w komórkach dyskowych, w odniesieniu do genotypów dla rs4148941 (Figura 2D), co sugeruje, że efekt jest specyficzny dla CHST3. rs4148941 wpływa na interakcję z miR-513a-5p, zmniejszając poziomy mRNA CHST3. rs4148941 i rs4148949 znajdują się w potencjalnych miejscach wiązania dla regionu zaszczepiającego miR-513a-5p i miR-626, odpowiednio (Figura 2E). Postawiliśmy hipotezę, że allel ryzyka funkcjonowałby poprzez interakcję z miR-513a-5p lub miR-626. W związku z tym przetestowaliśmy wpływ sekwencji CHST3 3. UTR zawierającej allele rs4148941-A / C lub rs148949-C / T przy użyciu układu reporterowego lucyferazy (Figura 2F) w unieśmiertelnionej ludzkiej linii komórek chondrocytów, C28I2. Wykryliśmy niewielką lub brak ekspresji miR-513a-5p lub miR-626 w komórkach C28I2 (dane nie przedstawione), a komórki C28I2 transfekowane konstruktami reporterowymi rs4148941-A / C lub rs1418949-C / T nie wykazały różnic w aktywności lucyferazy. (Figura 2F). Gdy powtórzyliśmy eksperymenty z egzogennym miR-513a-5p, aktywność lucyferazy dla reportera rs4148941-A była 27% mniejsza niż w komórkach transfekowanych reporterem rs4148941-C odpowiadającym przeciwciału (P = 0,02, Figura 2G). Przeciwnie, komórki transfekowane reporterem rs4148949-C lub -T w obecności miR-626 nie wykazały znaczącej różnicy w aktywności lucyferazy. Jest to zgodne z mRNA transkrybowanym z allelu ryzyka, ponieważ rs4148941 jest mniej stabilny. Aby ocenić, czy ta różnica alleliczna występuje w ludzkich próbkach IVD, oszacowaliśmy ilościowe transkrypty specyficzne dla allelu CHST3 u osób z genotypem AC dla rs4148941 przez pirosekwencjonowanie. Istniała istotna różnica pomiędzy względnymi poziomami produktów allelicznych A i C jako procent całkowitego mRNA CHST3 dla wszystkich tkanek IVD (Figura 2H). Te dane potwierdzają, że rs4148941-A jest allelem ryzyka czynnościowego i powoduje preferencyjne obniżenie mRNA CHST3. Na koniec wykazaliśmy, że miR-513a-5p ulegał ekspresji w tkankach IVD, co może wpływać na poziom mRNA CHST3. Nie było znaczącej różnicy w poziomie ekspresji miR-513a-5p pomiędzy próbkami kontrolnymi i LDD (Suplementowa Figura 5A), ani według genotypu ryzyka (Suplementowa Figura 5B), co sugeruje, że różnica allelowa jest przede wszystkim konsekwencją interakcja między miR-513a-5p a allelem ryzyka CHST3. Osoby heterozygotyczne z mutacjami w CHST3 wykazywały wczesne objawy nieprawidłowości dyskowych, zgodne z degeneracją. Rzadkie mutacje w CHST3, które zaburzają jego aktywność enzymatyczną, zgłaszano u pacjentów z recesywnymi nieprawidłowościami szkieletowymi, w tym z dysplazją Spondyloepiphy-zesa typu Omaniego, zespołem Larsena, dysostozą zębodo-biodrową i chondrodysplazją z wielokrotnym zwichnięciem (31. 36). Pomimo różnych oznaczeń diagnostycznych, pacjenci z mutacjami CHST3 mają podobne charakterystyki kliniczne i można je ogólnie zaklasyfikować jako dysplazję spondyloepiphoussealną z wrodzonymi zwichnięciami stawów i zmianami kręgów jako główne cechy (OMIM 603799). Do późnego dzieciństwa te cechy manifestują się i prowadzą do artretyzmu stawów biodrowych i kręgosłupa z degeneracją IVD, sztywną kifoskoliozą i skracaniem tułowia. Zidentyfikowano wiele mutacji, w tym missense, nonsense, małe insercje i delecje. Analiza biochemiczna wykazała, że większość tych mutacji powoduje utratę funkcji lub poważne obniżenie aktywności enzymatycznej (31, 33. 36). Dziedziczenie recesyjne byłoby zgodne z najrzadszymi mutacjami, które wpływają na enzymy. Chociaż szczegółowe informacje kliniczne dla heterozygotycznych rodziców nie były dostępne, można sobie wyobrazić, że zmniejszenie o 50% lub mniej aktywności CHST3 powoduje łagodniejszy fenotyp, który może mieć uprzywilejowane defekty kręgosłupa, prowadząc do wczesnej degeneracji dysku. Uzyskaliśmy i przejrzeliśmy skany MRI 3 rodziców z heterozygotycznymi mutacjami missens w CHST3, 2 chińskiego pochodzenia etnicznego (35) i z Omanu (33). Każda z nich wykazała degenerację IVD i związane z nią nieprawidłowości dyskowe, takie jak przepuklina (węzły Schmorla) chrzęstnej płytki końcowej, w okolicy lędźwiowej (Figura 3). W odniesieniu do naszej kohortowej populacji południowo-chińskiej, ich wyniki LDD z dostosowaniem wieku uznano za łagodne dla ich grupy wiekowej (30. 35 lat, pozycja 20). Uznano by, że mają one wcześniejszy początek degeneracji dysków, wynikający ze zmniejszonej aktywności CHST3. Jest to zgodne z naszą hipotezą, że zmniejszona ekspresja mRNA CHST3 jest czynnikiem ryzyka dla LDD. Figura 3 MRI osobników heterozygotycznych ze znanymi mutacjami w CHST3
[patrz też: komputerowy dobór fryzur, młody jęczmień a odchudzanie forum, rezonans magnetyczny otwarty warszawa ]
[przypisy: zjazd ptd 2015, towarzystwo diabetologiczne, sympozjum diabetologiczne zakopane 2015 ]