Zmieniono rozwój łożyska i wewnątrzmaciczne ograniczenie wzrostu u myszy transgenicznych wiążących IGF białko-1 cd

(a) mRNA hIGFBP-1 w decidua transgenicznych mat wykrywano za pomocą RT-PCR z użyciem pary primerów, która specyficznie amplifikuje 372-bp produkt z cDNA hIGFBP-1. Ścieżka 1, brak szablonu (kontrola ujemna); ścieżka 2, transgeniczne mysie RNA z wątroby (kontrola pozytywna); ścieżka 3, RNA deciduzy myszy typu dzikiego (kontrola negatywna); ścieżki 4. 6, ekwiwalenty całkowitego ekstraktu RNA transgenicznych samic uśmierconych we wskazanych punktach czasowych. M, drabina o 100 bp. (b) ekspresję hIGFBP-1 w wątrobie płodu wykryto jak opisano w a. Ścieżka 1, brak szablonu (kontrola ujemna); ścieżka 2, RNA transgenicznej myszy dorosłej wątroby wątroby (kontrola pozytywna); ścieżka 3, RNA myszy z wątroby dzikiego typu (kontrola negatywna); ścieżka 4, dzikie RNA z wątroby płodu; ścieżki 5 i 6, wątrobowe RNA z transgenicznych płodów odpowiednio e14.5 i e17.5. M, markery wielkości molekularnej. hIGFBP-1 w płynie owodniowym. hIGFBP-1 był łatwo wykrywalny w płynie owodniowym z F + / M. krzyże, ale był praktycznie niewykrywalny w krzyżu wzajemnym (rysunek 2a). Obecność hIGFBP-1 w płynie owodniowym z F + / M. Krycia były niezależne od genotypu płodu (ryc. 2b). Poziom hibofibu IFN w płodach transgenicznych i dzikich był podobny przy e11.5 i e14.5, ale przy e17.5 poziomy były wyższe w transgenicznych płodach (94,0. 19,3 vs. 26,0. 4,1, p <0,02) . W F + / M. krycia, poziomy hIGFBP-1 w płynie owodniowym spadały wraz z wiekiem ciążowym, spadając o 80% między e11.5 i e17.5. Rycina 2 Poziomy hyzfotyczne płynu hivFBP-1 w okresie ciąży. Całkowite poziomy hIGFBP-1 w płynie owodniowym zmierzono za pomocą swoistego dla gatunku testu immuno-matematycznego. Dane porównują poziomy hIGFBP-1 między (a) dzikimi i transgenicznymi samicami i (b) płodami typu dzikiego i transgenicznymi z F + / M. krycia. Dane przedstawiają średnie poziomy hIGFBP-1 w płynie owodniowym z 15. 25 płodów. Czarne słupki, transgeniczne; białe paski, typu dzikiego. * P <0,01 dla transgenicznego e17.5 versus typu dzikiego. Analiza Western blotand blot płynu owodniowego. Profil IGFBP w płynie owodniowym badano metodą western ligand. Wyniki testu były zgodne, pokazując spadek intensywności IGFBP o 32 kDa wraz ze wzrostem wieku ciążowego (ryc. 3a). Western immunoblotting potwierdziło tożsamość IGFBP 32 kDa jako IGFBP-1 (Figura 3b). Western blotting western wykrył również IGFBP o dużej masie cząsteczkowej (38-44 kDa), którego wielkość jest zgodna z wielkością IGFBP-3. Figura 3 Zachodni ligand i analiza immunoblot płynu owodniowego hIGFBP-1. (a) Western blotand blot płynu owodniowego z transgenicznych (tg) i dzikich (wt) płodów z F + / M. krycia. Ludzki IGFBP-1 migruje z pozorną masą cząsteczkową 30. 32 kDa. Wykryto także IGFBP o dużej masie cząsteczkowej (40-46 kDa), którego wielkość jest zgodna z wielkością glikozylowanego IGFBP-3. (b) Analiza Western immunoblot płynu owodniowego z błony pokazanej przy użyciu mysiego przeciwciała monoklonalnego anty-hIGFBP-1 (mAb 6305). e, zarodkowy dzień. Stan fosforylacji hIGFBP-1 w płynie owodniowym. Profil fosforylacji hIGFBP-1 w płynie owodniowym z F + / M. dopasowania określono przez porównanie wartości z całkowitego i niefosforylowanego testu hIGFBP-1. Fosforylowane izoformy hIGFBP-1 dominowały w każdym punkcie czasowym (Figura 4). Udział niefosforylowanego hIGFBP-1 osiągnął wartość e1,5 i zmniejszył się istotnie o 17,7. Ryc. 4 Profil fosforylacji płynu owodniowego hIGFBP-1. Płyn owodniowy z F + / M. Krycia badano pod kątem całkowitego i niefosforylowanego hIGFBP-1, a status fosforylacji białka wyrażono jako stosunek dwóch wartości (niefosforylowanej / całkowitej hIGFBP-1). Dane przedstawiają średnią 15. 25 próbek płynu owodniowego. * P <0,01 dla e14.5 versus e17.5. Wpływ nadekspresji hIGFBP-1 na wzrost i żywotność płodu i macicy. Aby wyeliminować potencjalny wpływ wielkości miotu na wzrost płodu i łożyska, ograniczyliśmy analizę do miotów o podobnej wielkości (osiem do dziesięciu płodów). Wpływ endogennej nadmiernej ekspresji hIFFBP-1 płodu na wzrost płodu i macicy zbadano przez porównanie morfometrii wzrostu transgenicznych i dzikich płodów z krycia F (3 / M + (Tabela 1). Wystąpiło niewielkie (10%) zmniejszenie masy transgenicznych płodów na poziomie e11.5 w porównaniu z typem dzikim, ale różnica ta zmniejszyła się o1,4,5, a w e17.5 płody typu dzikiego i transgeniczne miały identyczne cechy wzrostu. Wzrost łożyska był podobny zarówno dla koncepcji typu dzikiego, jak i transgenicznych podczas ciąży. Tabela 1: Skutki nadekspresji endogennego hIFFBP-1 płodu: morfometria wzrostu płodów typu dzikiego i transgenicznych w pokoleniach F. / M + przy e11.5, e14.5 i e17.5. Zbadanie wpływu hIGFBP na potomstwo (tj. Matczynego) -1 nad wzrostem płodu i macicy porównaliśmy charakterystykę wzrostu płodów typu dzikiego u samic typu dzikiego (F. / M +) i transgenicznych (F + / M.) (Tabela 2) [więcej w: ostre zapalenie migdałków, komputerowy dobór fryzur, rezonans magnetyczny otwarty warszawa ] [podobne: hemoroidy leki bez recepty, ostre zapalenie migdałków, młody jęczmień a odchudzanie forum ]