Typowy wariant kanału sodowego serca związany z nagłą śmiercią niemowląt u Afroamerykanów, SCN5A S1103Y ad 6

Podobnie jak w przypadku każdego badania asocjacyjnego, nasze odkrycia będą musiały być powtórzone w osobnej kohorcie Afroamerykanów. Nawet w stosunkowo jednorodnych genetycznie izolatach, stratyfikacja populacji pozostaje potencjalnym wyjaśnieniem fałszywie pozytywnych skojarzeń (41). Jednak allel jest związany z arytmią serca u osób dorosłych (22), a zmiany funkcji obserwowane tutaj przy niskim pH zapewniają wsparcie dla mechanizmu prawdopodobnej choroby. Częstotliwość występowania SIDS związanych ze zmianami kanałów SCN5A u Afroamerykanów w naszej kohorcie wynosiła około 5%. Zatem 7 z 133 przypadków SIDS było homozygotycznych pod względem YY lub heterozygotycznych pod względem innych zmian reszt w kanałach SCN5A. Zmiany w miejscach innych niż 1103 zmienionych funkcji kanałów przy normalnym pH (S524Y, 2 przypadki, R689H i E1107K, po przypadku, Q. Liu i SAN Goldstein, niepublikowane obserwacje). Podobnie jak osobnicy z odziedziczonym LQTS typu 3, te dzieci miały wzmocnienie SCN5A w funkcji pojedynczego zmutowanego allelu. Dla kontrastu, Afroamerykanów homozygotycznych pod względem Y1103 było zwiększone ryzyko wystąpienia SIDS pomimo kanałów, które wydawały się normalne w punkcie wyjściowym. Pozorna etiologia jest arytmią z powodu wtórnego wyzwania tolerowanego przez innych, być może z powodu kwasicy oddechowej z powodu hipowentylacji. Modulację genetyczną ryzyka związanego z narażeniem na wspólne czynniki zewnętrzne rozpoznaje się u pacjentów, u których rozwinęła się arytmia wywołana lekami z powodu mutacji w kanałach potasowych, które ujawniają się po ekspozycji na lek (10, 11) i jest spójna z patogenezą wielu trafień w przypadku arytmii serca. (23). Badanie to prowadzi nas do rozważenia badań genetycznych u Afroamerykanów nad SCN5A S1103Y w co najmniej 3 sytuacjach: niemowlęta z ostrymi przypadkami zagrażającymi życiu, rodzeństwo ofiar SIDS oraz pary doświadczające bezpłodności lub zgonu płodu (42). Biorąc pod uwagę widoczne zwiększone ryzyko, zaleca się kompleksowe badanie pośmiertnej analizy molekularnej około 2000 przypadków SIDS (liczba zgłaszana każdego roku w USA). W przypadku replikacji należy rozważyć prospektywne badania przesiewowe w dużej grupie afroamerykańskich niemowląt. Wreszcie, konieczne jest dalsze wspieranie skutecznych działań w zakresie zdrowia publicznego w celu zmniejszenia znanych czynników ryzyka środowiskowego (np. Skłonność do snu). SIDS twierdzi, że ta praca skutkuje, podobnie jak wiele powszechnych zaburzeń, genetyczną predyspozycją, która daje słabą tolerancję na wspólne wyzwania fizjologicznej homeostazy. Metody SIDS probandami. Zatwierdzenie ludzkich protokołów badań uzyskano z Komitetu Badania Ludzkiego Uniwersytetu Yale. Ciało po porodzie zebrano z 224 niespokrewnionych przypadków SIDS w latach 1985-1992. Informacje medyczne ograniczały się do płci, pochodzenia etnicznego, wieku w chwili śmierci, czasu autopsji i krótkiej historii. Ani rodzicielski DNA, ani historia rodziny nie były dostępne. Podczas gdy przypadki zdiagnozowano jako SIDS, nie jest pewne, że wszystkie niemowlęta z naszej kohorty zmarły na SIDS, ponieważ jest to diagnoza wykluczenia bez ostatecznego testu. Wygląda na to, że zdrowi dorośli Afroamerykanie służyli za kontrole; nie były badane pod kątem nagłego zgonu lub zespołu SIDS. Wytwarzanie genomowego DNA, amplifikacja i analiza mutacyjna. Genomowy DNA ekstrahowano z zamrożonych bloków serca, mózgu lub nerek (<1 cm3). Tkanki macerowano na lodzie, a DNA zebrano przez ekstrakcję fenol / chloroform, strącanie etanolem i zawiesinę w Tris-EDTA. Regiony kodujące SCN5A amplifikowano przy użyciu starterów i warunków PCR, jak pokazano w Tabeli dodatkowej. 5. Przeprowadzono analizę heterodupleksu denaturującego HPLC (WAVE; Transgenomic Corp.) w obecności lub nieobecności DNA typu dzikiego, a próbki wariantów sekwencjonowano bezpośrednio. W przypadku SCN5A S1103Y, wszystkie przypadki i kontrole afrykańsko-amerykańskich SIDS były przeszukiwane przez denaturującą HPLC i bezpośrednio sekwencjonowane. S1103Y był wcześniej nazywany S1102Y przez Splawski et al. (22), podczas gdy obecna nomenklatura mutacji dla SCN5A wykorzystuje teraz długą izoformę NM_198056.1 (43). Elektrofizjologia. Y1103 wprowadzono do SCN5A (NM_198056.1), mniej obfitej i dłuższej izoformy (43) przenoszonej w pcDNA1, stosując Pfu (Stratagene). Konstrukty przejściowo kotransfekowano SCN1B znakowanym GFP (podjednostka y kanału SCN5A serca, izoforma b; NM_001037) w komórkach HEK-293 przy użyciu lipofektaminy (Invitrogen Corp.). Po 24. 60 godzinach rejestrowano całe komórki przy użyciu wzmacniacza 200B i oprogramowania pCLAMP (wersja 8.0, Axon Instruments). Błędy napięcia zostały zminimalizowane za pomocą 80% kompensacji rezystancji szeregowej. Zapis całokomórkowy przeprowadzono stosując roztwory wewnętrzne (pipeta) i kąpielowe, jak opisano wcześniej (): wewnętrzny, 60 mM CsCl, 80 mM CsF, 10 mM EGTA, mM CaCl2, mM MgCl2, 5 mM Na2ATP i 10 mM HEPES (pH dostosowane do wskazania poziomów za pomocą CsOH); kąpiel, 130 mM NaCl, 5 mM CsCl, 2 mM CaCl2, 1,2 mM MgCl2, 10 mM HEPES i 5 mM glukozy (pH 7,4 z NaOH)
[więcej w: poradnia laryngologiczna olsztyn, młody jęczmień a odchudzanie forum, zjazd ptd 2015 ]
[więcej w: sympozjum diabetologiczne zakopane 2015, komputerowy dobór fryzur, ptd 2015 ]