Rola CD44 w wywołanym antygenem mysim modelu eozynofilii płucnej cd

Jako kontrolę swoistości, komórki inkubowano również z blokującym Ab KM114, a następnie barwi- no FL-HA. Ekspresję powierzchni komórkowej wiązania CD44 i HA badano przez bezpośrednią immunofluorescencję za pomocą cytometru przepływowego EPICS XL (Beckman Coulter Corp., Miami, Floryda, USA). Analizę cytometrii przepływowej przeprowadzono poprzez bramkowanie populacji limfocytów na podstawie ich względnej wielkości (rozproszenie światła w przód) i ziarnistości (rozproszenie kąta bocznego) na splenocytach. Analiza histochemiczna. Skrawki tkanek o grubości 5 mm przymocowano do szkiełek mikroskopowych i odparowano. Preparaty barwiono hematoksyliną i eozyną i badano pod mikroskopem świetlnym. Analiza statystyczna. Wszystkie dane wyrażono jako średnią plus lub minus SEM. Różnice między dwiema grupami eksperymentalnymi zbadano pod względem istotności statystycznej, stosując dwustronny test U Manna-Whitneya. Dla wielokrotnego porównania różnych grup test Kruskala-Wallisa dla ANOVA był znaczący. Następnie użyliśmy testu Scheffe F do porównania poszczególnych grup. Różnice związane z wartościami P mniejszymi niż 0,05 uznano za istotne. Wyniki mAb anty-CD44 hamuje eozynofil i akumulację limfocytów w BALF, ale nie zmienia liczby eozynofilów w szpiku kostnym. Dwie grupy myszy uczulano za pomocą Asc w PBS lub PBS przezna- cznie, zgodnie z procedurami opisanymi w Metodach. Liczbę komórek zapalnych w BALF oceniano 24 godziny po ostatnim podaniu przezdimnym antygenowi. Po ekspozycji na Asc całkowite leukocyty, granulocyty eozynochłonne i limfocyty znacząco wzrosły w BALF w porównaniu z myszami eksponowanymi na PBS. Podawanie szczurzego IgG (RIgG, 300 .g / mysz) nie miało wpływu (Figura 1a, Asc / RIgG), ale mAb anty-CD44 (KM201 lub IM7, 300 .g / mysz) podawano 12 godzin przed ostatnim Asc prowokować znacząco zmniejszoną liczbę eozynofili i limfocytów (P <0,05) (Figura 1a, Asc / KM201 lub Asc / IM7). Podawanie mniejszej dawki (30 .g / mysz) IM7 częściowo zahamowało infiltrację komórek zapalnych w BALF (Figura 1a, Asc / IM7 / 30). Dowody na naciekanie komórek zapalnych i działanie anty-CD44 były dalej badane za pomocą badania histologicznego. Leczenie przezskórne Asc zwiększało liczbę eozynofilów i limfocytów w tkance okołonaczyniowej i okołonaczyniowej, podczas gdy leczenie anty-CD44 (KM201 lub IM7), ale nie RIgG, hamowało tę infiltrację leukocytów (dane nie pokazane). Ekspozycja na Asc znacznie zwiększyła procent eozynofilów w szpiku kostnym, a na tę odpowiedź nie miało wpływu leczenie anty-CD44. Co ciekawe, zaznaczono eozynofilię we krwi obwodowej myszy leczonych KM201, ale nie myszy leczonych IM7 lub RIgG (P <0,05) (Figura 1b). Obserwacje te sugerują, że migracja leukocytów, szczególnie limfocytów i eozynofili, do tkanki płucnej objętej procesem zapalnym jest procesem zależnym od CD44. Fig. 1Anti-CD44 mAb blokuje akumulację eozynofili i limfocytów w BALF, ale nie wpływa na liczbę eozynofilów w szpiku kostnym. Liczbę komórek zapalnych w BALF (a) i odsetek eozynofilów w szpiku kostnym i krwi obwodowej (b) określono 24 godziny po prowokacji alergenem, jak opisano w Metodach. Dane reprezentują średnią. SEM. Przedstawione wartości są uśrednione z trzech do pięciu niezależnych eksperymentów. # Znaczące różnice (P <0,05) między myszami prowokowanymi Asc (Asc) i myszami prowokowanymi PBS (PBS). * Znaczące różnice (P <0,05) między myszami leczonymi mAb anty-CD44 z Asc (Asc / KM201, Asc / IM7 lub Asc / IM7 / 30) i myszami traktującymi RIgG prowokowanymi Asc (Asc / RIgG). MAb anty-CD44 zmniejszają cytokiny Th2 i chemokiny w BALF. Aby zbadać możliwe role różnych cytokin w alergicznym zapaleniu dróg oddechowych, stężenia w BALF cytokin Th1 (IFN-a) i Th2 (IL-4 i IL-5) zmierzono za pomocą testu ELISA 24 godziny po ostatniej prowokacji Asc. Po ostatnim podaniu przezskórnym Asc, wzrosty produkcji IL-4 i IL-5 w BALF były znacząco zmniejszone przez leczenie anty-CD44 (KM201 lub IM7) (P <0,05). Kontrola RIgG nie przyniosła efektu. IFN-. produkcja w BALF była niezmieniona przez prowokację Asc i leczenie anty-CD44 (Figura 2). Następnie stwierdziliśmy, że poziomy eotaksyny i TARC indukowano w BALF przez podawanie przezskórne Asc. MAb anty-CD44 (KM201, IM7), ale nie RIgGa hamowały wytwarzanie tych chemokin (P <0,05) (Figura 3); dlatego leczenie tymi odczynnikami zmieniło produkcję czynników wymaganych do produkcji i migracji eozynofilów. Figura 2 mAb mAntA-CD44 blokuje wytwarzanie cytokin w BALF. Stężenia IL-4, IL-5 i IFN-y w BALF oceniano 24 godziny po prowokacji alergenem, jak opisano w Metodach [hasła pokrewne: jogurt naturalny przepis, ostre zapalenie migdałków, młody jęczmień a odchudzanie forum ] [przypisy: skoki spadochronowe łódź, rozgrzewka przed ćwiczeniami, jogurt naturalny przepis ]