Następnie skrzyżowaliśmy myszy Ube3aStop / p + z indukowalną tamoksyfenem linią myszy CreERT + (17) w celu określenia skuteczności reaktywacji Ube3a na późniejszych etapach rozwoju pourodzeniowego. W szczególności indukowaliśmy reaktywację genu Ube3a po 3 tygodniach (u myszy nieletnich.), 6 tygodniach (myszy. U nastolatków.) I w wieku 14 tygodni (myszy. Dorosłe.), Z testami behawioralnymi przeprowadzonymi w średnim wieku 16 tygodni. Odpowiednio 22 tygodnie i 28 tygodni (ryc. 2A). W tych punktach czasowych rozwoju poziomy białka UBE3A u myszy Ube3aStop / p +, CreERT + traktowanych tamoksyfenem przywrócono do 70%> 100% poziomów typu dzikiego, co jest porównywalne z poziomem uzyskanym przez wczesną reaktywację embrionalną (Figura 2, B. D Dodatkowa Figura 2 i Figura 1B). Co ważne, ekspresja UBE3A u myszy Ube3aStop / p +, CreERT + traktowanych podłożem była również podobna do obserwowanej w Ube3aStop / p +; Cre. i myszy Ube3am p / p + (Figura 2D i dodatkowa Figura 3), demonstrując ścisłą kontrolę reaktywacji genu. Nieletnia reaktywacja Ube3a spowodowała całkowite uratowanie deficytu koordynacji ruchowej. W przeciwieństwie do tego reaktywacja nastolatków tylko częściowo uratowała koordynację ruchową, podczas gdy nie zaobserwowano poprawy w przypadku reaktywacji u dorosłych (Figura 3A). Łącznie wyniki te wskazują na krytyczny okres rozwoju motorycznego zależnego od Ube3a, który kończy się między 3 a 6 tygodniem po porodzie. Rycina 3 Reaktywacja pourodzeniowa ekspresji Ube3a ujawnia krytyczny okres dla ratowania behawioralnego. (A. E) Testy behawioralne u myszy miotowych Ube3aStop / p + i WT traktowanych albo nośnikiem (Vehicle.) Albo tamoksyfenem (Tamox.) Wykazują wyraźne krytyczne okresy dla odzyskania deficytów behawioralnych. Liczby myszy (WT, CreERT + Vehicle / WT, CreERT + Tamox./Ube3aStop/p+;CreERT+ Veh./Ube3aStop/p+;CreERT+ Tamox.): (A) Przyspieszenie rotarod po młodzieńczym (n = 22/20/22/22 ), adolescencja (n = 11/11/10/11) i dorosła (n = 11/9/12/13) reaktywacja genu. (B) Test zakopywania marmuru po młodzieńczej (n = 21/20/20/20), młodzieńczej (n = 20/20/21/23) i dorosłej (n = 13/11/14/15) reaktywacji genu. (C) Test otwartego pola po reaktywacji genów młodocianych (n = 21/21/22/22), adolescentów (n = 11/11/10/11) i dorosłych (n = 10/8/9/10). (D) Badanie budowy gniazda po młodzieńczej (n = 12/13/14/13), adolescencji (n = 14/13/16/17) i dorosłej (n = 9/8/9/8) reaktywacji genu. (E) Wymuszona próba pływania po młodzieńczej (n = 17/19/18/19), adolescencji (n = 11/11/10/11) i dorosłej (n = 11/8/9/9) reaktywacji genu. Wszystkie dane reprezentują średnią. SEM. Do porównań statystycznych zastosowano dwuczynnikową ANOVA lub powtarzalne pomiary 2-drożnej ANOVA z genotypem i traktowaniem jako zmiennymi niezależnymi. Istotny wpływ genotypu został zidentyfikowany we wszystkich testach behawioralnych (patrz Tabela dodatkowa 2). ** P <0,01 dla znaczenia genotypu. Krytyczne okno do ratowania deficytów koordynacji ruchowej różniło się od okna ratowania fenotypów związanych z autyzmem i lękiem, takich jak zadanie zakopywania marmuru, test otwartego pola, test budowy gniazda i test wymuszonego pływania, który można uratować poprzez reaktywację embrionalną ( Figura 1, D. G i dodatkowa Tabela 1), ale nie przy ponownej aktywacji młodzieńczej, młodzieńczej lub dorosłej (Figura 3, B. E i Tabela Uzupełniająca 2). Fenotyp epilepsji był także oporny na reaktywację Ube3a po urodzeniu, ponieważ drgawki utrzymywały się pomimo reaktywacji genu w wieku młodzieńczym (Figura 4A). Następnie staraliśmy się potwierdzić, czy fenotyp epilepsji u myszy AS odmiennie reaguje na leczenie lekami przeciwpadaczkowymi (AED) u myszy z reaktywacją Ube3a. Dorosły (> 8 tygodni) Ube3am. / P + i Ube3aStop / p +; CreERT. myszy leczono przez 5 dni walproinianem lub klonazepamem, stosując projekt obejmujący osobniki. Przed leczeniem każda mysz z AS wykazała napady audiogeniczne (Figura 4B). Jednakże, po 5 dniach leczenia którymkolwiek z tych LPP, u wszystkich myszy całkowicie uniknięto napadów. Ponadto, 3 dni po zaprzestaniu leczenia AED (okres wymywania), wszystkie myszy z AS ponownie wykazywały napady audiogeniczne (Figura 4B). Dane te potwierdzają, że napady można z powodzeniem leczyć u dorosłych myszy AS za pomocą konwencjonalnych leków przeciwpadaczkowych, ale są one jednak niewrażliwe na reaktywację Ube3a po urodzeniu. Figura 4 Reaktywacja u U3a u młodych zwierząt nie powoduje poprawy podatności na padaczkę, ale zabezpieczenie Schaffera CA1 LTP jest w pełni odzyskane. (A) Podatność na padaczkę u myszy Ube3aStop / p +; CreERT + utrzymuje się po reaktywacji genu Ube3a w wieku młodzieńczym (n = 8 myszy / grupę). (B) Indukcja napadów toniczno-klonicznych indukowanych przez audiogenną stymulację (wskazaną czerwonymi strzałkami) jest skutecznie leczona przez podawanie AED (niebieski prostokąt ilustruje podawanie leku i okres wymywania) u dorosłych Ube3aStop / p +; Cre. (n = 2) i Ube3am p + (n = 12) myszy [hasła pokrewne: poradnia laryngologiczna olsztyn, hemoroidy leki bez recepty, komputerowy dobór fryzur ] [hasła pokrewne: trening umiejętności społecznych scenariusz, koktajl z natki pietruszki, hemoroidy leki bez recepty ]
Partnerzy serwisu:
Zobacz tez:
Wzrost płodu w e11.5 jest zaburzony u transgenicznych matek. Ograniczenie wzrostu jest niezależne od genotypu płodu, co sugeruje, że jest ono wtórne do niewydolności łożyska / osobnika. Wzrost płodu był… Read More Zmieniono rozwój łożyska i wewnątrzmaciczne ograniczenie wzrostu u myszy transgenicznych wiążących IGF białko-1 czesc 4
Spekulujemy, że łagodna redukcja CHST3 spowodowana podatnością na SNP może spowodować degenerację krążka u dorosłych w połączeniu z innymi czynnikami ryzyka. Niedawna publikacja wykazała, że miRNA prawdopodobnie biorą udział w… Read More Zwyrodnienie dysku lędźwiowego jest związane z wariantem węglowodanowej sulfotransferazy 3 ad 6
Pokazujemy, że zubożenie poszczególnych podzbiorów limfocytów (komórek CD4, CD8 lub NK) przed leczeniem CpG ODN nie wpływa na ochronę. Na koniec, wykazujemy, że plazmocytoidowe DC (pDC) są rekrutowane do miejsca… Read More Kluczowa rola dla komórek dendrytycznych plazmacytoidów w ochronie antywirusowej przez mikrobicyd pochwowy CpG ODNa na bazie pochwy ad