Samice myszy Ube3aStop / p + skrzyżowano z konstytutywną linią ekspresjonującą Cre z wczesnym embrionalnym początkiem rekombinacji (odnośnik 13 i Figura 1A). Ponieważ ojcowski allel Ube3a jest epigenetycznie wyciszany, myszy z matczyną odziedziczoną kasetą stopu bez ekspresji Cre (myszy Ube3aStop / p +, Cre3) wykazały poważną utratę białka UBE3A (znanego również jako białko powiązane z E6 [E6AP]), porównywalne z zmniejszenie ekspresji UBE3A obserwowanej w tradycyjnym mysim modelu AS z odziedziczoną po matce delecją Ube3a (Ube3am p +) (Figura 1B, patrz także Figura 2D dla porównania z myszami Ube3am p +). Barwienie immunohistochemiczne Ube3aStop / p +; Cre. wycinki mózgu były nieodróżnialne od próbek Ube3amp / p + myszy (Suplementowa Figura 1B). Wyniki te potwierdzają, że flokowana kaseta stopu jest wysoce skuteczna w blokowaniu transkrypcji matczynego allelu Ube3a, przy zachowaniu normalnego epigenetycznego wyciszenia allelu ojcowskiego. Rycina 1. Reaktywacja bioniczna ekspresji Ube3a ratuje fenotypy behawioralne podobne do AS. (A) Schematyczne przedstawienie reaktywacji Ube3a (wskazane przez szarą strzałkę) podczas rozwoju embrionalnego myszy i punktu czasowego testu behawioralnego. (B) Analiza Western błot hipokampa (n = 4 na genotyp), korę (n = 5) i móżdżek (n = 5) z miotów z Ube3aStop / p + i WT skrzyżowanych z zarodkowo aktywną linią Cre. (C. H) Ube3aStop / p +; Cre. myszy wykazują silne behawioralne fenotypy AS, które mogą być w pełni uratowane przez embrionalną reaktywację genu Ube3a u myszy Ube3aStop / p +, Cre +. Liczba myszy (WT; Cre + / Ube3aStop / p +; Cre. / Ube3aStop / p +; Cre +): przyspieszenie rotarod, n = 14/8/17; test zakopywania w marmurze, n = 24/18/28; test w otwartym polu, n = 14/8/17; test budowy gniazda, n = 7/7/7; wymuszony test pływania, n = 14/8/17; test epilepsji, n = 7/10/8. Wszystkie dane reprezentują średnią. SEM. ANOVA z genotypem jako zmienną niezależną zastosowano do porównań statystycznych. Znaczący wpływ genotypu stwierdzono we wszystkich testach behawioralnych (patrz Tabela dodatkowa 1). * P <0,05, ** P <0,01; Analiza post hoc Bonferroniego. Figura 2 Analiza molekularna u myszy Ube3aStop / p +; CreERT + ujawnia skuteczną reaktywację matczynego genu Ube3a po indukcji tamoksyfenem. (A) Schemat przedstawiający reaktywację Ube3a uzyskaną przez traktowanie tamoksyfenem (szare strzałki) w każdej grupie eksperymentalnej. (B. D) Ube3aStop / p +, CreERT + myszy z indukowaną postnatalnie indukowaną ekspresją genu ekspresjonują UBE3A na poziomach porównywalnych do osiągniętych przy wczesnej reaktywacji genu embrionalnego w hipokampie (młodzieńcze, n = 3 na genotyp, adolescent, n = 4 na genotyp, dorosłe, n = 4 na genotyp), kory (młodzieńcze, n = 3 na genotyp, dorastające, n = 4 na genotyp, dorosłe, n = 3. 4 na genotyp) i móżdżku (młodzieńcze, n = 3 na genotyp, adolescenty, n = 4 na genotyp, dorosły, n = 5 na genotyp). Dane reprezentują średnią. SEM. Następnie badaliśmy efektywność reaktywacji Ube3a po wywołanym przez Cre a usuwaniu kasety zatrzymanej floxed. Poziomy białka UBE3A przywrócono u myszy Ube3aStop / p +, Cre + do 89% poziomów WT w hipokampie, 82% w korze mózgowej i 99% w móżdżku. Ponadto subkomórkowy rozkład UBE3A był nieodróżnialny pomiędzy myszami Ube3aStop / p +, Cre + i WT, Cre +, walidującymi funkcjonalność metody reaktywacji Ube3a (Figura 1B i Suplementowa Figura 1B). Wczesna reaktywacja genu embrionalnego zapobiega manifestacji fenotypów AS. Zaburzona koordynacja ruchowa, cechy autystyczne, lęk i padaczka są cechami charakterystycznymi pacjentów z AS, dla których analogiczne fenotypy są dobrze poznane u myszy z modelem AS (3, 14. 16). Zgodnie z oczekiwaniami na podstawie utraty ekspresji Ube3a, Ube3aStop / p +; Cre. myszy wykazywały znaczące zmiany w wydajności rotarod (Figura 1C), zakopywanie marmuru (Figura 1D), eksploracja pola otwartego (Figura 1E), budowanie gniazda (Figura 1F) i audiogenny próg napadu (Figura 1H), z których wszystkie są również obecne w klasyczny model myszy Ube3amp / p + AS (3, 14). Ponadto, zidentyfikowaliśmy wysoce odporny fenotyp w teście wymuszonego pływania, obecnym zarówno w klasycznym mutancie Ube3amp / p + (dane nie pokazane), jak i warunkowym modelu myszy Ube3aStop / p + AS (Figura 1G). Zgodnie z terapeutycznym potencjałem reaktywacji genu Ube3a, myszy Ube3aStop / p +, Cre + wykazywały pełne uwolnienie wszystkich tych neurologicznych i behawioralnych nieprawidłowości, potwierdzając, że reaktywacja embrionalna ekspresji białka UBE3A jest wystarczająca do zapobiegania manifestacji fenotypów AS w wielu domenach ( Figura i dodatkowa tabela 1). Reaktywacja genów u młodych, dorosłych i dorosłych zwierząt ujawnia obecność wyraźnych okresów krytycznych [hasła pokrewne: koktajl z natki pietruszki, trening umiejętności społecznych scenariusz, ergonomia stanowiska pracy biurowej ] [więcej w: sympozjum diabetologiczne zakopane 2015, komputerowy dobór fryzur, ptd 2015 ]
Partnerzy serwisu:
Zobacz tez:
Mutacje te były nieobecne w DNA od ponad 100 niespokrewnionych zdrowych osób. Te dwa aminokwasy znajdują się w segmencie obejmującym błonę, w segmencie S5 domeny IV, i są dobrze zakonserwowane… Read More Podwójna mutacja w rodzinach z okresowym paraliżem definiuje nowe aspekty powolnej inaktywacji kanału sodowego cd
Pomimo wczesnego niepowodzenia w zapobieganiu utracie masy kostnej i zmniejszeniu liczby osteoklastów, podawanie bisfosfonianów zapobiegło indukowanej glukokortykoidami apoptozie osteoblastów. Metody Zwierzęta. Użyto myszy C57Bl i Swiss Webster (Charles River Laboratories,… Read More Promowanie przeżycia osteoklastów i antagonizmu apoptozy osteoklastów wywołanej bisfosfonianami przez glukokortykoidy ad
Ponadto do ochrony potrzebne były IFN typu I. IFN typu I indukowane w wyniku inokulacji CpG ODN pochwy muszą działać zarówno na zrębowe, jak i hematopoetyczne przedziały, aby zahamować replikację… Read More Kluczowa rola dla komórek dendrytycznych plazmacytoidów w ochronie antywirusowej przez mikrobicyd pochwowy CpG ODNa na bazie pochwy ad 5