Prozapalny peptyd Helicobacter pylori aktywuje monocyty w celu wywołania dysfunkcji limfocytów i apoptozy czesc 4

Limfocyty wzbogacone w komórki NK (105 komórek / studzienkę) inkubowano z autologicznymi monocytami przez 16 godzin w 37 ° C i testowano na cytotoksyczność przeciwko komórkom K562 znakowanym 51Cr (104 komórek / studzienkę). (a) Kultury komórkowe traktowano pożywką hodowlaną (kontrola, puste kółka), Hp (2. 20) (wypełnione kółka) lub peptydem kontrolnym Hp1 (50. M) (wypełnione pudełka). Wyniki stanowią procent lizy komórek (średnia . SEM czterokrotnie). Hp (2. 20) nie wpływa znacząco na cytotoksyczność w nieobecności monocytów (nie pokazano), ale zwiększa indukowane przez monocyty zahamowanie cytotoksyczności we wszystkich badanych proporcjach monocytów / limfocytów (a). Monotytozależne hamowanie cytotoksyczności komórek NK przez Hp (2. 20) zostało potwierdzone w dziesięciu doświadczeniach z użyciem krwi od różnych dawców. W tych doświadczeniach hamowanie indukowane przez Hp (2 . 20) 3 było statystycznie znaczące w porównaniu do indukowanego przez kontrolne monocyty w 37% monocytach (P <0,005, test sumy rang Wilcoxona) i 44% monocytach (P <0,005). (b) Kultury komórkowe traktowano Hp (2. 20) (wypełnione kółka) lub Hp (2. 20) + SOD (50 U / ml) + katalaza (200 U / ml) (wypełnione pudełka). Wyniki stanowią procent lizy komórek (średnia wartość. SEM wynika z ośmiu doświadczeń z użyciem krwi od różnych dawców). We wszystkich stosunkach monocytów / limfocytów powyżej monocytów 1: 5, SOD + katala znacząco uratował cytotoksyczność komórek NK z hamowania indukowanego przez Hp (2. 20). (P <0,01. 0,001, test sumy rang Wilcoxona dla par). Ekspresja CD3 .. Komórki NK i inne limfocyty odzyskane od zwierząt z nowotworem (21) lub pacjentów z litym nowotworem, w tym gruczolakoraki żołądka (22, 23), wykazują zmniejszoną ekspresję krytycznej cząsteczki przenoszącej sygnał, CD3. (TcR.). Proponowane powiązanie tworzenia rodników tlenowych przez monocyty / makrofagi z CD3 związanym z rakiem zniknięcie (24), wraz z naszym odkryciem, że Hp (2. 20) wywołało wytwarzanie rodników tlenowych, zachęciło nas do zbadania CD3. ekspresja komórek NK po ekspozycji na aktywowane monocyty Hp (2 ^ 20). Problem w badaniu CD3. komórek NK jest to, że ekspresja charakterystycznych markerów powierzchniowych na komórkach NK, takich jak CD56 lub CD16, jest silnie zmniejszona przez inkubację z monocytami / makrofagami. Przeciwnie, komórki T zachowują swoją główną strukturę identyfikacji CD3. po ekspozycji na monocyty (12, 15). Dlatego odpowiednia metoda wykrywania zmian w CD3. wyrażenie to badanie CD3 limfocyty w preparatach limfocytów wzbogaconych w komórki NK. Stwierdziliśmy, że aktywowane monocyty Hp (2. 20), ale nie monocyty traktowane Hp1 (nie pokazano), indukowały zanik komórek CD3. + Z żywych limfocytów wzbogaconych w komórki CD3 .,; ponad 80% tych limfocytów stanowiły komórki NK CD56 + (Figura 5a). Hamowanie zostało całkowicie uniemożliwione przez SOD i katalazę (Figura 5b). Figura 5Hp (2. 20) (50. M) wyzwala zanikanie cząsteczki przenoszącej sygnał CD3. z komórek NK. Monocyty i / lub limfocyty wzbogacone w komórki NK inkubowano jak opisano w legendzie z fig. 4. Po inkubacji mieszaniny limfocytów / monocytów, komórki w CD3. bramka limfocytowa (> 80% z nich to komórki NK CD56 +) została przebadana pod kątem ekspresji CD3. za pomocą cytometrii przepływowej. Histogram na ekranie pokazuje CD3. ekspresja za pomocą bramkowanego CD3. kontrolują limfocyty + 25% monocytów (linia 1), limfocyty traktowane Hp (20. 20) a + 25% monocytów (linia 2), limfocyty kontrolne + 50% monocyty (linia 3) i limfocyty traktowane Hp (2. 20). + 50% monocytów (linia 4). Histogram na b pokazuje odpowiadający CD3. ekspresja kontroli CD3 limfocyty (linia 1), limfocyty traktowane Hp (20. 20) a + 25% monocytów (linia 2) i limfocyty traktowane Hp (20. 20) a + 25% monocytów traktowanych katalazą i SOD (linia 3). Histogram c pokazuje CD3. ekspresja kontroli CD3 limfocyty (linia 1), limfocyty traktowane Hp (20. 20). + 25% monocyty + histamina (50. M, linia 2) i limfocyty traktowane Hp (20. 20) a + 25% monocytów + histamina + ranitydyna (50 M, linia 3). Peptyd Hp (2. 20) dodano 20 minut po rozpoczęciu inkubacji. Wszystkie dane wyrażono jako procent komórek CD3 (3 w CD3. brama, zestaw zawierający tylko żywe limfocyty. Podobne wyniki uzyskano w trzech oddzielnych eksperymentach. Apoptotyczna śmierć komórek w komórkach NK i komórkach T. Zwiększony poziom apoptozy jest częstą cechą limfocytów odzyskanych od pacjentów z zaawansowanym rakiem żołądka (23). Zmiany morfologiczne charakterystyczne dla apoptozy limfocytowej obserwowano po całonocnej inkubacji limfocytów z monocytami aktywowanymi przez Hp (2. 20). Apoptozę indukowaną przez Hp (2 . 20) zaobserwowano w komórkach NK i komórkach T CD3 (3 (Figura 6a). Apoptozę potwierdzono za pomocą testu fragmentacji DNA (test TUNEL) i barwienia aneksyną V (ref
[patrz też: ergonomia stanowiska pracy biurowej, hemoroidy leki bez recepty, chirurgia klatki piersiowej ]
[przypisy: ile kalorii ma chleb żytni, gimnastyka korekcyjna zestaw ćwiczeń, skoki spadochronowe łódź ]