Promowanie przeżycia osteoklastów i antagonizmu apoptozy osteoklastów wywołanej bisfosfonianami przez glukokortykoidy czesc 4

Ponadto, przeprowadzono test zależności odpowiedzi od dawki dla liniowego trendu między nośnikiem a deksametazonem, stosując liniowe współczynniki kontrastu. Aby ocenić zmiany w hodowlach komórek szpiku ex vivo oraz pomiary BMD 4 i 10 dni, zastosowano dwukierunkową ANOVA. Jeśli wariancje były nierówne, do określenia stopni swobody zastosowano przybliżenie Satterthwaite. Różnice między środkami grupy z testem replikacji CFU-OB oceniano za pomocą testu t Studenta. Serialne zmiany w BMD analizowano za pomocą mieszanego modelu efektów powtarzanych pomiarów (28). Dane histomorfometryczne badano za pomocą jednokierunkowej ANOVA. Porównania interesów zostały określone a priori, a ich wartości P dostosowane za pomocą korekty Bonferroniego (29). Współczynniki korelacji Pearsona obliczono w celu przetestowania związku między dwiema niezależnie zmierzonymi zmiennymi. Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za znaczące. Wyniki Wpływ glikokortykosteroidów na przeżycie osteoklastów in vitro. Zgodnie z oczekiwaniem dodanie alendronianu (10 5 5 M) do hodowli osteoklastów uzyskanych z mysich komórek szpiku kostnego w obecności M-CSF i RANKL spowodowało ponad trzykrotny wzrost odsetka apoptotycznych osteoklastów (Figura 1a). Co uderzające, gdy deksametazon w stężeniu 10-10 10 do 10 ~ 7 M połączono z alendronianem, apoptoza osteoklastów została całkowicie zniesiona, a wartości nie różniły się znacząco od wartości obserwowanej dla samego nośnika. Sam deksametazon również zmniejszał apoptozę osteoklastów przy stężeniach 10. 8 i 10. 7 M w porównaniu z podłożem. Co więcej, istniał trend liniowy dla dawek samego deksametazonu w celu zmniejszenia odsetka apoptotycznych osteoklastów w porównaniu do nośnika (P <0,0002), mocny dowód, że glukokortykoidy zwiększają przeżycie osteoklastów nawet przy braku dodanego proapoptotycznego środka. Podobne wyniki zaobserwowano w drugim eksperymencie. Figura Glikokortykoidy zmieniają narodziny i śmierć osteoklastów. (a) Osteoklastyczna apoptoza po nośniku, alendronian, deksametazon lub preinkubacja przez godzinę z alendronianem, a następnie deksametazonem. * P <0,05 w stosunku do pojazdu; ** P <0,0001 vs. pojazd. (b) aktywacja kaspazy-3 w dowolnych jednostkach fluorescencyjnych (AFU) na minutę na miligram białka po podłożu; alendronian; deksametazon; alendronian, a następnie deksametazon; alendronian, deksametazon i RU 486; alendronian i RU 486; lub sam RU 486. * P <0,0001 vs. pojazd. (c) aktywacja kaspazy-9 po pojeździe; alendronian; deksametazon; alendronian, a następnie deksametazon; alendronian, deksametazon i RU 486; alendronian i RU 486; lub sam RU 486. * P <0,005 vs. pojazd. (d) Kwantyfikacja prekursorów osteoklastów w szpiku kostnym pobranych od zwierząt uśmierconych w 4 i 10 dniu po ekspozycji na placebo (białe słupki) lub prednizolon (czarne słupki). * P <0,02 vs. placebo. Zgodnie z powyższymi wynikami, deksametazon całkowicie hamował indukowaną alendronianem aktywację kaspazy-3 (Figura 1b) i kaspazy-9 (Figura 1c). Deksametazon hamował również 2,4-krotny wzrost aktywacji kaspazy-8 indukowany przez alendronian (P <0,02, dane nie przedstawione). Efekt ten był ewidentnie zależny od receptora glukokortykoidowego ujawnionego przez jego pełną blokadę za pomocą 10. 8M RU 486, silnego antagonisty receptora glukokortykoidowego (30). RU 486 nie wywierał żadnego wpływu na aktywację kaspazy-3, kaspazy-8 lub kaspazy-9. Podobne wyniki zostały powtórzone w drugim eksperymencie. Wpływ podawania glukokortykosteroidów na zawartość szpiku kostnego w progenitorach osteoklastów i osteoblastów. W hodowlach komórek szpiku ex vivo od myszy otrzymujących prednizolon przez 4 lub 10 dni, liczba komórek osteoklastycznych utworzonych w odpowiedzi na 1,25 (OH) 2D3 zmniejszyła się odpowiednio o 55% i 41% (Figura 1d), co odzwierciedla zmniejszenie liczby progenitorów osteoklastów w szpiku kostnym. Równolegle z hodowlami komórek szpiku kostnego od zwierząt otrzymujących prednizolon liczba progenitorów osteoblastów reprezentowanych przez kolonie CFU-OB zmniejszyła się o 74% po 10 dniach podawania glukokortykoidów w porównaniu z grupą kontrolną otrzymującą placebo, ale nie nastąpiła żadna istotna zmiana po zaledwie 4 dniach ( Figura 2a). Zgodnie z indukowaną przez prednizolon redukcją CFU-OB, 10 nM prednizolonu in vitro osłabiło replikację tych progenitorów osteoblastów wzmacniających tranzyt w komórkach szpiku kostnego myszy o około 60% (Figura 2b). Figura 2 (a) Ocena ilościowa CFU-OB tworzonego w szpiku kostnym pobranego od zwierząt uśmierconych w 4 i 10 dniu po ekspozycji na placebo (białe słupki) lub prednizolon (czarne słupki). Komórki szpiku uzyskano z kości udowej samców myszy, a komórki od każdej myszy hodowano osobno [podobne: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, polskie towarzystwo diabetologiczne, poradnia laryngologiczna olsztyn ] [przypisy: ostre zapalenie migdałków, młody jęczmień a odchudzanie forum, poradnia laryngologiczna olsztyn ]