Podwójna mutacja w rodzinach z okresowym paraliżem definiuje nowe aspekty powolnej inaktywacji kanału sodowego czesc 4

Odzyskiwanie z szybkiej inaktywacji nie wykazało różnicy między WT i trzema zmutowanymi kanałami (Figura 4a). Ostatnio postawiono hipotezę, że deaktywacja może, oprócz defektu inaktywacji kanału, przyczyniać się do choroby (21, 22). Stałe czasowe dezaktywacji monitorowano przy napięciach w zakresie od> 120 mV do> 60 mV i nie ujawniono żadnej znaczącej zmiany między WT i pojedynczymi mutantami F1490L i M1493I lub podwójnymi kanałami zmutowanymi (Figura 4b). Rysunek 4 Odrodzenie z szybkiej inaktywacji i dezaktywacji. (a) Odzyskiwanie z szybkiej inaktywacji. Komórki były wstępnie pobrane do 0 mV przez 200 milisekund w celu dezaktywacji całego prądu, a następnie potencjały odzysku od. 120 do. 60 mV (. 120 mV pokazano) dla zwiększenia czasu odzyskiwania zostały zastosowane przed impulsem testowym do 0 mV (20 milisekund) do oznaczenia frakcji prądu odzyskanego. Ślady otrzymane przy impulsie testowym dopasowano do funkcji o pojedynczej wykładni. (b) Prądy ogonowe zostały wywołane przez impuls testowy o długości 0,5 milisekundy do +40 mV, a następnie impuls repolaryzacji mieszczący się w zakresie od. 120 do. 60 mV. Powstałe prądy zostały dopasowane do pojedynczego wykładniczego rozpadu i wyrażone jako funkcja napięcia dla WT (wypełnione koła; n = 20), F1490L (wypełnione romby; n = 20), M1493I (wypełnione kwadraty; n = 20), oraz F1490L-M1493I (otwarte kółka; n = 20). Wartości reprezentują średnią. SEM. Zwiększenie powolnej inaktywacji w mutacjach HyperKPP. Donoszono, że defekt powolnej inaktywacji może być ważnym czynnikiem w utrzymywaniu się paraliżu u niektórych pacjentów z HyperKPP (23). Dlatego badaliśmy powolną inaktywację w czterech kanałach. Figura 5a pokazuje, że powolna inaktywacja była znacząco zwiększona w zmutowanych kanałach F1490L (s1 / 2 = A 73.1. 2,5 mV, n = 9, P <0,005) i w podwójnych kanałach zmutowanych (s1 / 2 =. 73,8. 1,9 mV, n = 18, P <0,05), ale nieznacznie przesunięte w prawo dla zmutowanych kanałów M1493I (s1 / 2 = <62,3> 2,1 mV, n = 9, P = 0,23). Punkt środkowy powolnej inaktywacji kanałów WT wynosił. 65,9. 1,7 mV (n = 23). Zwiększona powolna inaktywacja może mieć poważne konsekwencje dla pobudliwości. Jak pokazuje fig. 5b, chociaż tylko 50% kanałów WT jest powolnie nieaktywnych, gdy są utrzymywane przy ~ 60 mV (przez 50 sekund), prawie 90% kanałów F1490L-M1493I jest powolnie nieaktywnych przy tym samym potencjale utrzymywania. Zwiększona powolna inaktywacja obserwowana w podwójnym mutancie może radykalnie zmniejszyć liczbę funkcjonalnych kanałów. Porównaliśmy także przebieg czasowy dla rozwoju i powrotu do stanu wolnego inaktywacji dla kanałów WT i podwójnych mutantów. Rozwój powolnej inaktywacji badano przy ~ 50 mV (Figura 5c). Stała czasowa dla rozwoju powolnej inaktywacji była podobna dla WT (6,2. 0,7 s, n = 4) i podwójnych mutantów (6,4. 0,6 s, n = 4) kanałów. Jednakże, po 2 minutach przy ~ 50 mV, znacznie więcej podwójnych kanałów mutantów jest powolnie inaktywowanych (89. 1%, n = 4, P <0,005) niż kanałów WT (72. 3%, n = 4). Odzyskiwanie z powolnej inaktywacji było wolniejsze dla kanałów podwójnego mutanta i F1490L niż dla kanałów WT (Figura 5d). Odzysk mierzono przy ~ 100 mV po 5 minutach przy 0 mV. Po sekundzie dostępnych jest znacznie więcej kanałów WT (38. 4%, n = 9) niż podwójne kanały mutantów (16. 2%, n = 8, P <0,001) do aktywacji. Jeśli przebieg czasowy dla powrotu do stanu powolnej inaktywacji jest dopasowany do funkcji podwójnej wykładniczej, to pierwsza stała czasowa jest znacznie większa dla kanałów podwójnego mutanta (4,3. 0,6 sekundy, n = 8, P <0,0002) niż dla kanałów WT (1,5. 0,2 sekund, n = 9), ale druga stała czasowa jest podobna (32,6. 1,6 sekundy vs. 33,6. 4,2 sekundy). Odzyskanie z powolnej inaktywacji zbadano również przy ~ 80 mV dla WT i podwójnych kanałów mutantów (dane nie pokazane). Jak wykazali Hayward i in. (1997) (14), odzysk z powolnej inaktywacji jest około 10-krotnie wolniejszy przy ~ 80 mV niż przy ~ 100 mV dla kanałów WT wyrażanych w komórkach HEK 293. Odzyskiwanie z inaktywacji było również wolniejsze dla podwójnych kanałów mutantów przy ~ 80 mV, a po 10 sekundach znacznie więcej kanałów WT niż podwójne zmutowane kanały są dostępne do aktywacji. Figura 5 Udoskonalenie powolnej inaktywacji w kanałach F1490L-M1493I. (a) Wolna dezaktywacja stanu stacjonarnego w hSkM1 (wypełnione kółka, n = 23), F1490L (wypełnione romby; n = 9), M1493I (wypełnione kwadraty; n = 9) i F1490L-M1493I (otwarte kółka; n = 18 ) kanały. Pierwszy etap polega na utrzymywaniu komórek w potencjałach w zakresie od ~ 130 do 10 mV w krokach 10 mV przez 50 sekund. 30-milisekundowy impuls przywracający do. 100 mV i 20-milisekundowy impuls testowy do. 10 mV zostały podane przed ponownym zwiększeniem potencjału utrzymywania [hasła pokrewne: trening umiejętności społecznych scenariusz, koktajl z natki pietruszki, skoki spadochronowe łódź ] [więcej w: ergonomia stanowiska pracy biurowej, ile kalorii ma chleb żytni, gimnastyka korekcyjna zestaw ćwiczeń ]