Podwójna mutacja w rodzinach z okresowym paraliżem definiuje nowe aspekty powolnej inaktywacji kanału sodowego ad 5

Potencjał utrzymywania zwiększono o 10 mV bezpośrednio po każdym impulsie odzyskiwania / sekwencji impulsu testowego. Termin ten określamy sekwencyjnie, ponieważ nie można odzyskać kanałów po powolnej inaktywacji dla każdego impulsu testowego; oczekuje się, że sekwencyjne zmiany w potencjale utrzymywania będą naśladować zmiany w potencjale utrzymywania dłuższych czasów trwania. Krótkie hiperpolaryzacyjne impulsy regeneracyjne mogą być użyte do usunięcia szybkiej inaktywacji tuż przed testowym impulsem do pomiaru powolnej inaktywacji (31). Prąd szczytowy wywołany impulsem testowym do ~ 10 mV wykreślono jako ułamek maksymalnego prądu. (b) Większa część prądu F1490L-M1493I niż prąd WT jest powolna inaktywowana przy ~ 60 mV. Komórki utrzymywano przez 50 sekund przy ~ 60 mV, pozostawiono do odzyskania przez 30 milisekund przy ~ 100 mV, a następnie depolaryzowano do <10 mV w celu określenia frakcji kanałów, które są powolnie inaktywowane. Dla porównania, całkowity prąd dostępny z potencjału podtrzymującego wynoszącego. 100 mV jest również pokazany dla kanałów WT i F1490L-M1493I. (c) Wykazano, że rozwój powolnej inaktywacji jest szybszy w przypadku F1490L-M1493I (puste kółka; n = 5) niż w przypadku kanałów WT (wypełnione kółka; n = 5). Komórki utrzymywano przy ~ 100 mV w celu wydłużenia czasu kondycjonowania. (d) Znormalizowany prąd Na + w reprezentatywnym WT (wypełnione kółka, n = 9), F1490L (wypełnione romby, n = 8), M1493I (wypełnione kwadraty, n = 7) i F1490L-M1493I (otwarte kółka, n = 8) komórki odzyskujące się z powolnej inaktywacji (impuls kondycjonujący wynosi. 50 mV). Oś czasu jest logarytmiczna. Protokół odzysku wymagał około 45 minut do zakończenia i miał dwie fazy: krótkie czasy odzyskiwania uzyskano z poszczególnymi impulsami odzyskiwania, a długie czasy odzyskiwania uzyskano w ciągłym nagrywaniu. Czy podwójna mutacja wpływa na interakcję pomiędzy. i . podjednostki. Na bramkowanym napięciem kanale Na + składa się. i . podjednostki w mięśniach szkieletowych. Rola. wykazano, że podjednostka wpływa na dezaktywację kanału, gdy ulega pomostowi w oocytach. Jednak ma to niewielki wpływ na kinetykę szybkiej inaktywacji, gdy jest ona koeksprymowana. w komórkach HEK 293. Odnotowano depolaryzujące przesunięcie krzywej inaktywacji spowodowane p1 (24). Badania zlokalizowały interakcje między. i podjednostki yl do pętli między segmentami transbłonowymi S5 i S6 (25). Lokalizacja podwójnego podstawienia aminokwasu w segmencie S5 sprawia, że atrakcyjne jest poszukiwanie potencjalnych interakcji między podjednostką a i segmentem S5. Komórki HEK 293 zostały kotransfekowane. (hSkM1-WT, F1490L, M1493I lub podwójny mutant F1490L-M1493I) i A (z mózgu). Te eksperymenty nie wykazały żadnej znaczącej zmiany interakcji pomiędzy. i podjednostki (1 (tabela 2). Powolna inaktywacja nie została zmieniona przez obecność podjednostki a1. Nie zaobserwowano znaczącej zmiany w odzyskiwaniu z szybkiej inaktywacji lub w stałej czasowej dezaktywacji między WT poddawanej koekspresji z Ai i innymi zmutowanymi kanałami współeksprymowanymi również z A (dane nie przedstawione). Tabela 2 Wpływ podjednostki A na aktywację kanału, szybka i powolna inaktywacja Dyskusja Zachowanie bramkowania pojedynczych mutantów (F1490L i M1493I) i kanałów podwójnie zmutowanych (F1490L-M1493I) badano na linii komórkowej ssaka, aby zrozumieć przyczynę choroby. w dwóch rodzinach dotkniętych tą podwójną mutacją. W porównaniu z dotychczas zbadanymi 24 pojedynczymi mutacjami (Ryc. 1), zachowanie podwójnych kanałów mutantów wyrażanych w komórkach HEK 293 było unikalne pod kilkoma względami: nie zaobserwowano trwałego prądu Na + po 100-milisekundowym, a nawet 25-milisekundowym teście depolaryzacja; nie zaobserwowano żadnej zmiany ani w krzywych aktywacji, ani w inaktywacji, dlatego nie zarejestrowano wzrostu prądu w oknie; i nie zaobserwowano większych zmian w stałej czasowej dezaktywacji. Podwójne zmutowane kanały najwyraźniej wykazują tylko wzmocnienie powolnej inaktywacji w porównaniu z kanałami WT (Figura 5). Istnieją dwa mechanizmy, dzięki którym kanały Na + mogą dezaktywować: szybko i wolno. Szybka inaktywacja ma początek i powrót do zdrowia rzędu milisekund, natomiast powolna inaktywacja rozwija się i odzyskuje w skali sekund lub nawet minut. Chociaż znana jest strukturalna podstawa szybkiej inaktywacji, molekularna jednostka zaangażowana w wolną inaktywację kanału Na + jest nadal przedmiotem badań. Badania obejmujące mutacje powodujące chorobę wykazały, że segmenty S4-S5 (13, 14, 26), S5 (8), S6 (15, 27) i region porów (28) mogą brać udział w powolnej inaktywacji. Choroby kanału mięśniowego Na + są często funkcjonalnie związane z wadami szybkiej inaktywacji kanału. Kinetyka szybkiej inaktywacji nie miała wpływu na makroskopowe prądy Na + F1490L, M1493I i F1490L-M1493I w porównaniu z WT przy wszystkich testowanych napięciach [hasła pokrewne: polskie towarzystwo diabetologiczne, jogurt naturalny przepis, rozgrzewka przed ćwiczeniami ] [przypisy: skoki spadochronowe łódź, rozgrzewka przed ćwiczeniami, jogurt naturalny przepis ]