Ludzkie fosfolambanowe null daje śmiercionośną rozszerzoną kardiomiopatię, która ujawnia zasadniczą różnicę między myszą a człowiekiem cd

Rekombinowany adenowirus, oznaczony jako Ad.PLN-L39stop, który kodował zarówno zmutowane białko PLN-L39, jak i GFP kontrolowane przez oddzielne promotory CMV, zbierano po 7 dniach, a następnie amplifikowano i oczyszczano przez wirowanie w gradiencie CsCl. Mechanika kurczliwa miocytów dorosłych szczurów. Miocyty z dorosłych samców szczura Sprague-Dawley (około 300 g; Harlan Laboratory, Indianapolis, Indiana, USA) izolowano z tkanki lewej komory (23). Komórki ponownie zawieszono w pożywce Claycomb uzupełnionej 0,2% BSA, penicyliną (100 U / ml) i streptomycyną (100 ug / ml) przy gęstości 105 komórek na 100 cm2 powleczonej laminatem szalce lub 2 x 104 komórek. na studzienkę 6-studzienkowych płytek ze szkiełkami nakrywkowymi pokrytymi warstwą laminatu. Po 2 godzinach miocyty zakażono adenowirusami Ad.PLN-L39stop, Ad.PLN-WT lub Ad.GFP przy wielokrotności infekcji 500. Dwadzieścia cztery godziny po zakażeniu, miocyty przylegające do szkiełek nakrywkowych inkubowano w mM Odczynnik Ca2 + -Krebs Henseleit i parametry mechaniczne lub Ca2 + -kinetyczne w miocytach obciążonych fura-2AM (2 .M) zostały określone. Pola miocytów wybrano losowo i stymulowano przy 0,5 Hz. Transgeny Ca2 + zostały skalibrowane zgodnie z opisem (24). Dane analizowano za pomocą oprogramowania komputerowego Felix (Photon Technology International, Lawrenceville, New Jersey, USA). Testy biochemiczne. Ilościowe immunoblotowanie homogenatów sercowych zastosowano do określenia poziomów białek o działaniu z białkiem RP i SR Ca2 +, jak opisano wcześniej (25). Histologia. Próbki lewej komory pobrano od pacjentów podczas przeszczepu serca, utrwalono przez noc w 10% formalinie, buforowano PBS, odwodniono w 70% etanolu i przeniesiono do ksylenu, a następnie do parafiny. Próbki serca z zatopionymi w parafinie podzielono na 4 urn i wybarwiono trichromem Massona. Statystyka. Dane prezentowane są jako średnie. SEM. Porównania zostały wykonane przy użyciu testu Student. St odpowiednio. Wartość AP mniejsza niż 0,06 została uznana za statystycznie istotną. Wyniki Ocena kliniczna. Siedemdziesiąt sześć pacjentów z rozszerzoną kardiomiopatią i 30 normalnymi osobami rekrutowano z Centrum Onkologii Kardiochirurgii Onassis. Trzech pacjentów przeszło transplantację serca, a dwóch było na liście oczekujących. Średnia frakcja wyrzutowa, określona za pomocą echokardiografii, wynosiła 22,9%. 9,91%. Uwarunkowania towarzyszące w kohorcie obejmowały nadciśnienie (8%), cukrzycę (6%), hipercholesterolemię (12%) i migotanie przedsionków (12%). Identyfikacja zmutowanego genu PLN w rodowodach kardiomiopatii. Sekwencjonowanie regionu kodującego gen PLN z 76 niespokrewnionych osobników z rozszerzoną kardiomiopatią ujawniło jednego pacjenta homozygotycznego pod względem transfuzji T-to-G w kwasie nukleinowym 116 (T116G) (Figura 1a). Mutacja ta nie została znaleziona u 30 niespokrewnionych zdrowych osób w podziale na wiek i pochodzenie etniczne lub u 220 niespokrewnionych zdrowych osób. Mutacja przekształca kodon dla Leu-39 na przedwczesny kodon stop TGA (oznaczany jako zł-L39stop), obcinając 52-aminokwasowe białko w domenie transbłonowej II, które jest wysoce konserwatywne wśród gatunków (18) i zaangażowane w regulację PLN Powinowactwo SERCA2a do Ca2 + (6). Stosując mutagenezę ze skanowaniem alaninowym, wykazaliśmy wcześniej, że mutacje w tej domenie mogą być związane albo ze zwiększeniem, albo z utratą efektu hamującego o wartości PLN na SERCA2a (21). Rycina 1Mutacja w genie PLN i analiza dziedziczenia w pokrewnych I. (a) Częściowe sekwencje nukleotydowe regionu kodującego zł u zdrowych osobników oraz u pacjentów z rozszerzoną kardiomiopatią, którzy byli homozygotyczni lub heterozygotyczni wobec transwersji T116G, która przekształca kodon dla Leu -39 (TTA) do kodonu stop (TGA). (b) Rodowód dla obecności lub nieobecności mutacji T116G w pokrewnym I. Probandy III-4 i III-6, które były homozygotyczne pod względem mutacji L39stop, zdiagnozowano z rozszerzoną kardiomiopatią i wymagały transplantacji serca. Kwadraty reprezentują samców, a koła reprezentują samice. Linia oznacza, że pacjent nie żyje. (c) Analiza histologiczna eksplantowanych serc z probantów III-4 i III-6 (którzy byli homozygotyczni pod względem mutacji L39stop), które zostały zabarwione trichromem Massona, zilustrowano masywne śródmiąższowe zwłóknienie i dysocjację mięśnia sercowego (strzałki). Pasek skali, 50 .m. Rozszerzony rodowód przypadku indeksu pokazano na rysunku 1b. Obie osoby homozygotyczne rozwinęły ciężką rozszerzoną kardiomiopatię wymagającą transplantacji serca. W przypadku mężczyzny wystąpienie ciężkiej niewydolności serca i przeszczepienia serca wystąpiło w wieku 17 lat, a wkrótce potem zmarł z powodu powikłań chirurgicznych. Jego homozygotyczna siostra wykazywała jedynie łagodny echokardiograficzny przerost lewej komory w wieku 20 lat, ale rozwijała się postępująca poszerzenie lewej komory i niewydolność serca, wymagająca transplantacji serca w wieku 28 lat.
[hasła pokrewne: ptd, rozgrzewka przed ćwiczeniami, jogurt naturalny przepis ]
[podobne: gimnastyka korekcyjna zestaw ćwiczeń, skoki spadochronowe łódź, rozgrzewka przed ćwiczeniami ]