Estrogen nasila działanie białka receptora komórek T u samic myszy z doświadczalnym zapaleniem mózgu i rdzenia cd

Stężenie estrogenu monitorowane przed i podczas EAE w reprezentatywnych kontrolnych i wszczepionych myszach konsekwentnie mieściło się w oczekiwanym zakresie. Figura Ochrona męskich, ale nie samic myszy BV8S2 Tg z białkiem BV8S2. Współczesne samce (aib) lub samice (cid) traktowano solanką / IFA lub GST / IFA (kontrole) lub 12,5 jig białka BV8S2 / IFA w dniach. 7 i +3 względem prowokacji za pomocą MBP-Ac1- 11 peptyd / CFA + perseptygen do indukowania EAE, z (b i d) lub bez (a i c) cotygodniowego podwyższenia z 12,5 .g białka BV8S2 wstrzykniętego podskórnie w soli fizjologicznej. Zwróć uwagę na prawie całkowitą ochronę przeciwko EAE u mężczyzn z podwyższoną częstotliwością i opóźnionym początkiem, ale na ewentualny rozwój ciężkiego EAE u kobiet z podwyższoną masą ciała. Dane od samców myszy pochodzą z ref. 19. Tabela Stężenie 17.-estradiolu w surowicy utrzymywane u myszy przez wszczepione granulki hormonalne i ich fizjologiczne odpowiedniki Myszy codziennie oceniano pod kątem objawów klinicznych EAE według następującej skali: 0, bez objawów; 1, bezwładny ogon; 2, umiarkowane osłabienie kończyn tylnych (chód wadliwy); 3, umiarkowanie ciężkie osłabienie kończyn tylnych; 4, silne osłabienie kończyn tylnych; 5, paraplegia; 6, czworokropia, kondycja kondycji. Skumulowany wskaźnik choroby (CDI) określono dla każdej myszy przez zsumowanie codziennych wyników klinicznych, a średnią CDI plus minus SEM obliczono dla grup kontrolnych i eksperymentalnych. Średnią ocenę kliniczną (MCS) obliczono dla każdej myszy przez podzielenie CDI przez czas trwania (dni) choroby, a średnią plus lub minus SEM obliczono dla grup kontrolnych i eksperymentalnych. Test proliferacji. Śledziony (SPL) usunięto chirurgicznie i przygotowano zawiesiny pojedynczych komórek. Odpowiedź proliferacyjną limfocytów T oznaczano na 96-studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania inkubując 4 x 105 komórek śledziony z antygenem w optymalnym stężeniu 20 .g / studzienkę. Hodowle inkubowano przez 72 godziny w 37 ° C i 7% CO2, przez ostatnie 18 godzin w obecności 0,5. Ci 3H-tymidyny. Komórki zebrano na filtrach z włókna szklanego, a wychwyt tymidyny określono metodą scyntylacji cieczy. Średnia cpm. SEM obliczano z potrójnych studzienek. Wskaźnik stymulacji (SI) otrzymano przez podzielenie cpm ze stymulowanych antygenem wgłębień przez cpm z dołków bez antygenu. SI w hodowlach stymulowanych samym GST odjęto od SI indukowanego białkiem GST-BV8S2. Pomiar wydzielania cytokin. Komórki śledziony zawieszono w 4 x 106 komórek / ml w pożywce stymulacyjnej zi bez specyficznych antygenów. Supernatanty z hodowli komórkowych odzyskano po 72 godzinach i zamrożono w temperaturze ~ 70 ° C, aż do momentu, gdy były potrzebne do testu cytokin. Pomiar cytokin przeprowadzono za pomocą testu ELISA opracowanego w naszym laboratorium (19), przy użyciu specyficznych dla cytokin przeciwciał wychwytujących i wykrywających (PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA). Pozyskiwanie przeciwciał dla IFN-a, IL-10 i TGF-a rozcieńczono do 2 ug / ml w buforze do powlekania wodorowęglanem (0,1 M NaHCO3, pH 8,2). Standardowe krzywe dla każdego testu wytworzono przy użyciu rekombinowanych mysich cytokin (PharMingen), a stężenie cytokin w supernatantach komórek określono przez interpolację z odpowiedniej krzywej standardowej. Ocena odpowiedzi przeciwciał. Reaktywność przeciwciał wobec peptydu MBP-Ac1-11 i białka GST-BV8S2 określono za pomocą pośredniego testu ELISA, jak opisano wcześniej (37). W skrócie, surowice odpornościowe myszy z leczonych i kontrolnych myszy Tg z EAE inkubowano w studzienkach opłaszczonych antygenem i związane przeciwciało wykrywano spektrofotometrycznie za pomocą króliczego przeciwciała przeciw-mysiego znakowanego peroksydazą i o-fenylenodiaminy jako substratu. Różnice między grupami określano za pomocą testu Student. Wycięcie jajników. Jajniki usunięto przez wykonanie dwóch obustronnych nacięć (5 mm) w połowie odległości między podstawą ogona i środka grzbietu, a następnie małe nacięcia (2,5 mm) przez ścianę otrzewnej. Jajniki naciągnięto przez nacięcia, chwytając tłuszcz perio-wegierski, podwiązano naczynia krwionośne i usunięto jajniki. Nacięcie zamykano chirurgicznymi zaciskami skórnymi. Zwierzęta pozostawiono do wyzdrowienia przez co najmniej tydzień przed rozpoczęciem eksperymentów. Wykrywanie androgenów i estrogenów. Myszy pobrano przez nakłucie serca i krew pozostawiono do skrzepnięcia w temperaturze 4 ° C przez noc. Próbki odwirowano, a surowice zebrano i przechowywano w temperaturze ~ 80 ° C aż do wykonania analizy hormonalnej. Stężenie estrogenu w surowicy oznaczano za pomocą testu radioimmunologicznego (RIA) po chromatografii kolumnowej Sephadex LH-20, jak opisano wcześniej (38). Wszystkie próbki analizowano w jednym teście. Wyniki Różnice płci w leczeniu EAE z białkiem BV8S2. Porównaliśmy odpowiedź na szczepienie z białkiem BV8S2 u myszy z myszami płci męskiej płci męskiej i żeńskiej Tg, stosując dwa różne protokoły
[hasła pokrewne: zjazd ptd 2015, trening umiejętności społecznych scenariusz, ptd ]
[hasła pokrewne: koktajl z natki pietruszki, hemoroidy leki bez recepty, ostre zapalenie migdałków ]